小鼠組織直接PCR試劑盒

產(chǎn)品描述

本試劑盒可直接快速地對小鼠組織（如鼠尾、鼠耳、鼠趾、肌肉等）樣本進行PCR擴增，具有的樣本兼容性。本試劑盒配備了強力的裂解緩沖液，可以快速裂解樣品，釋放基因組DNA。裂解液可以直接加入到PCR反應(yīng)體系中，無需精提純化，操作方便。此外，本試劑盒對樣品投入量要求低，5 mg小鼠組織或1-5 mm鼠尾即可進行實驗。

本試劑盒提供的2× Mouse Direct PCR Mix為2倍濃度的熱啟動PCR反應(yīng)液，包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程，降低污染幾率。

該試劑盒可用于轉(zhuǎn)基因鑒定、小鼠基因分型等。

產(chǎn)品組分

a)Buffer ML 為裂解緩沖液，包含了強力蛋白變性劑，請戴手套操作。

b)Buffer MT 為終止緩沖液，用以終止Buffer ML的裂解功能。

c)2× Mouse Direct PCR Mix：包含熱啟動Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強劑、優(yōu)化劑、穩(wěn)定劑和電泳指示染料等。

運輸方法

冰袋運輸。

保存方法

組分A：2-8℃保存，有效期1年。使長時間多次使用，請分裝凍存，避免交叉污染。

組分B/C：-20℃保存，避免反復(fù)凍融。有效期1年。

小鼠組織直接PCR試劑盒 操作方法

樣品基因組DNA釋放

1. 剪取5-10 mg動物組織或1-5 mm鼠尾，置于1.5 mL離心管中；

2. 在上述離心管中加入90 μL Buffer ML，輕輕渦旋使得樣品被裂解液浸潤，短暫離心；

3. 在恒溫孵育儀中設(shè)置95℃孵育15 min；

4. 加入10 μL Buffer MT，輕彈混勻，終止裂解;

5. 選做步驟：12000 rpm離心2 min；

6. 將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管，4℃或-20℃保存或直接取上清用于后續(xù)PCR擴增。

【注】：組織應(yīng)盡量剪碎，以便裂解反應(yīng)更順利進行。

【注】：95℃孵育，一般15 min即可滿足多數(shù)PCR需求。若需要的DNA量較大或樣品較難裂解，可將時間延長至30 min。組織塊不需裂解，殘余的部分在后續(xù)離心步驟中可被除去。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)體系

【注】：各組分使用前應(yīng)充分混勻。

a）模板使用量：建議按1-10%總體系量取用模板，20 μL體系建議采用1 μL上清液作為模板；

b）引物終濃度：0.2-0.4 μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時，可在0.1-0.5 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度；

c）反應(yīng)體系：推薦使用20 μL，也可根據(jù)使用習(xí)慣調(diào)整體系體積大小；

d）體系配制：配制好PCR反應(yīng)體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應(yīng)液集于管底。

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