PCR Master Mix 超高保真酶預(yù)混液 產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

      本產(chǎn)品包含 Profusion™ DNA Polymerase、dNTPs 和優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，濃度為2×。 使用時(shí)只需加入模板、引物，并補(bǔ)足水至 Mix 終濃度為 1×即可。Profusion™ DNA Polymerase為多種采用先進(jìn)基因工程改造而來的超高保真酶添加延伸因子混合而成，極大的提高了擴(kuò)增長(zhǎng)度、擴(kuò)增速度、保真性和產(chǎn)量。Profusion™ PCR Master Mix 是長(zhǎng)片段超保真快速擴(kuò)增的選擇產(chǎn)品。本制品含紅色示蹤染料，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進(jìn)行電泳；也可經(jīng)過純化處理，以用于酶切、連接、熒光測(cè)序等后續(xù)操作。PCR 產(chǎn)物為平末端，不需要加 A 頭，可直接用荷瑞 pTOPO Blunt 平末端系列載體（貨號(hào) HRF0161、HRF0171）克隆。

      2×Profusion™ PCR Master Mix 具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)體系只需加入引物 和模板即可，并可以通過兩步法的程序進(jìn)行擴(kuò)增，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟，節(jié)省了時(shí)間。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.擴(kuò)增速度快：延伸速度可以達(dá)到 3-4kb/min，是pfu的 6-8 倍。
2.擴(kuò)增產(chǎn)量高：一般PCR產(chǎn)物量比傳統(tǒng) pfu產(chǎn)量高 50%-100%。
3.優(yōu)異保真性：保真度是taq的54倍以上。一般隨機(jī)挑一個(gè)菌測(cè)序便是正確無突變菌落。
4.擴(kuò)增長(zhǎng)度長(zhǎng)：以復(fù)雜基因組 DNA 為模板適合擴(kuò)增不超過 10kb 左右的產(chǎn)物，以簡(jiǎn)單基因組、質(zhì)粒和噬菌體DNA為模板適合擴(kuò)增不超過15kb 左右的產(chǎn)物。

產(chǎn)品應(yīng)用

基因克隆；復(fù)雜 DNA 模板擴(kuò)增；高通量建庫。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期2年。

注意事項(xiàng)

1）解凍后 Master Mix 可能出現(xiàn)晶體沉淀,使用前務(wù)必渦旋振蕩混勻至沉淀消失，不影響試劑性能。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作；

3）本產(chǎn)品僅作科研用途！

PCR Master Mix 超高保真酶預(yù)混液 推薦PCR反應(yīng)體系（冰上配制）

參考模板用量（50 μl 反應(yīng)體系）：

建議PCR擴(kuò)增程序

注意事項(xiàng)：
1. 2×Profusion™ PCR Master Mix擴(kuò)增速度快，質(zhì)粒和簡(jiǎn)單基因組等簡(jiǎn)單模板可以采用10-15秒/kb；復(fù)雜模板如人類基因組可以采用20-25 秒/kb。
2. 如果電泳發(fā)現(xiàn)主帶上下拖尾模糊現(xiàn)象，或者泳道出現(xiàn)從上樣孔拖下來的涂抹帶現(xiàn)象，一般提示延伸時(shí)間過長(zhǎng)，梯度縮短延伸時(shí)間（建議 10-15 秒/kb 為梯度減少延伸時(shí)間）直到獲得滿意結(jié)果。
3. 對(duì)于GC含量很高的模板，預(yù)變性和變性溫度可以提高到98℃。Profusion™ DNA Polymerase耐熱性強(qiáng)，98℃對(duì)酶的活性無影響。
4. 如果擴(kuò)增模板GC含量高或者模板復(fù)雜擴(kuò)增效果不佳時(shí)，可在反應(yīng)混合物中加入DMSO到終濃度1%-8%，按照1%梯度增加摸索最佳濃度。或者加入甜菜堿至終濃度1.0-1.7M。并采用降落PCR（Touch down PCR）